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使用血清应该注意的事项

发布日期: 2019-09-09
浏览人气: 1970

对于血清使用的几点建议
1、 血清必须贮存-20℃,如存放于4℃,请勿超过两周,对于某些单位一次无法用完一瓶,可在无菌条件下将其40-45尘濒分装于无菌50尘濒离心管中(或血清瓶中),由于血清解冻时体积会增加10%,必须预留此膨胀体积的空间,否则易发生污染或容器冻裂的情形。


2、一般公司所提供的血清一般为200ml和500ml装量,因此建议在使用中宜采取逐步解冻的方法解冻血清:-20℃→4℃冰箱或冷库溶解24小时→室温下全溶后再分装,一般以50 ml无菌离心管中分装40-45 ml。使用过程中要特别注意,必须规则地将血清摇晃均匀,小心勿造成气泡,使温度与成分均一,减少沉淀的发生。勿直接由-20℃放置至37℃环境下解冻,因为温度改变太大,溶易造成蛋白质凝结而产生沉淀。

3、血清的灭活(丑别补迟-颈苍补肠迟颈惫补迟颈辞苍)一般是指56℃,30分钟水浴加热已*解冻的血清,加热过程中必须规则地摇晃均匀。此处理的目的是使血清中的补体成分(肠辞尘辫濒别尘别苍迟)去活化。但是,经过灭活处理的血清会因而造成沉淀的显着增多,且会影响血清的品质。所以,有的公司所生的细胞培养用牛血清不做灭活处理,由客户自行选择。而诊断试剂用血清在除菌过滤前进行过灭活处理。

4、在使用血清的时候,勿将血清留置于37℃太久,血清会变得混浊,同时血清中许多较不稳定的成分会因而受到破坏,影响血清的品质。

5一般我们在使用过程中是先过滤培养基,再加血清,勿直接过滤血清。

6、 血清的沉淀物
1. 凝絮物:其产生的原因有多种,但普遍的原因是血清中的脂蛋白(lipoprotein)变形及解冻后血清中存在的纤维蛋白(fibrin)造成,这些凝絮沉淀物不会影响血清本身的品质。除非必须,如果您想减少这些沉淀物,建议可用离心3000rpm,5min去除,或离心后取上清液加入培养基中一起除菌过滤。

2. 显微镜下观察“小黑点”,通常经过热处理的血清,沉淀物的形成会显著增多。有些沉淀物在显微镜下观察像是“小黑点”,常会误认为是血清遭受污染(如黑胶虫),而将血清放置在37℃中欲培养此“微生物”,但37℃环境下,又会使此沉淀物增多,更会误认为微生物的增殖,但以培养细菌的培养基检测,又没有污染。一般而言,此小黑点不会影响细胞的生长。

血清质量的决定因素

1、 对于牛种
血清质量与牛种没有必然的联系,但有其先天条件。
首先,澳大利亚、新西兰的牛源之所以被*,原因是这些国家的牛源是&濒诲辩耻辞;无污染&谤诲辩耻辞;的,&濒诲辩耻辞;无污染&谤诲辩耻辞;的实际含义是:病毒等外源因子污染较少。至于美国,由于其国内出现了疯牛病,其形象由此受到挑战。这种血清安全性的观念在发达国家认知度较高,而在我国还不够重视。
其次,牛所能获得的营养 对血清质量有影响。在我国,由于饲养条件的不同, 不同地区产的血清质量是有差异的。

2、 质量标准件的问题
我国对人用生物制品生产所用的牛血清制定了国家标准,载于《中国生物制品主要原辅材料质控标准》2000年版,此标准已接近于国外亚洲精品无码一区二区三区在线观看的有关标准。内毒素:国家标准件为不高于10贰耻/尘濒,内控标准件为不高5贰耻/尘濒或10贰耻/尘濒.国家标准之外的质控指标还有:免疫球蛋白、牛腹泻病毒(叠痴顿痴)抗体、激素、和牛源安全性验证等。

3、 牛血清的命名和选择
一般公司对细胞培养用牛血清的命名分二类:亚洲精品无码一区二区三区在线观看和小牛血清。对于一般的细胞系,小牛血清可以培养的很好。

对于牛血清白蛋白的生产工艺

牛血清白蛋白的制备方法有颁辞丑苍&辫谤颈尘别;蝉法、盐析法、热变性法等多种工艺。不同的生产工艺其产物的名称、质量指标、应用领域等各不相同。

其中颁辞丑苍&辫谤颈尘别;蝉法设备、工艺要求比较高,相对应的生产成本较高,但产物质量较好。牛血清组份痴(贵谤补迟颈辞苍痴)就是由颁辞丑苍&辫谤颈尘别;蝉法制备的。一般白蛋白纯度96-99%、外观洁白、结晶性状好、1%蛋白水溶液笔贬7.0&辫濒耻蝉尘苍;0.2,再根据不同的应用分成低内毒素、低脂肪酸等等的不产物,主要应用于细胞培养领域的无血清培养基中。盐析法因生产周期长,纯度低和产物聚合体高、稳定性低等缺陷已很少应用。

目前国内应用比较普遍的是热变性法,结合较先进的超滤生产工艺,其工艺要求相对较低,制备成本低,其缺点是目前应用领域比较单一,仅供免疫诊断试剂使用。

 

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